Como cientistas dna cortado com enzimas de restrição
Os cientistas usam enzimas de restrição
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Você pode pensar em enzimas de restrição tão pouco tesouras moleculares que deslizam ao longo do DNA e cortar a espinha dorsal do açúcar-fosfato onde quer que encontrar o seu sítio de restrição.
A figura mostra como uma enzima de restrição pode fazer um corte numa peça circular de ADN e transformá-lo em um pedaço linear.
Video: Engenharia Genética/Biotecnologia/DNA Recombinante/Enzima de Restrição/Clonagem Gênica/ Transgênicos
Algumas enzimas de restrição fazer um corte a direito através da espinha dorsal do ADN, ao passo que outros, como o mostrado na figura anterior, fazer cortes escalonados. As enzimas que fazem cortes escalonados deixar pedaços pequenos de ADN de cadeia simples nas extremidades dos fragmentos que cortam. Os cientistas chamam esses pedaços de fita simples extremidades pegajosas porque eles têm sequências complementares umas às outras e tendem a aderir entre si por ligações de hidrogénio.
Você pode obter duas peças diferentes de DNA para ficar juntos, se você cortá-los ambos com uma enzima de restrição que faz extremidades pegajosas. As duas peças tendem a atribuir um ao outro, tornando possível combiná-los em um DNA recombinante molécula que tem de DNA a partir de duas fontes.
Um pedaço pequeno, linear de ADN virai é mostrado na figura a seguir. O DNA viral contém sítios de restrição para duas enzimas de restrição diferentes, chamado EcoR1 e HindIII.
As localizações dos locais de restrição estão marcadas com setas no quadro do ADN viral. O comprimento de ADN é dada em kb, que corresponde a quilo pares de bases. (Quilo significa mil, assim uma kilobase é de 1000 pares de bases de ADN).
Se você usou apenas EcoR1 para cortar uma amostra que continha muitas cópias deste pedaço de DNA, quantos diferente pedaços de tamanho de DNA seria o resultado? O tamanho seriam eles? Se você cortar o DNA com apenas HindIII, o que seria o resultado? E o que aconteceria se você cortar o DNA com ambas as enzimas?
Exemplo de corte do ADN com enzimas de restrição.Para perguntas 2-4, testar sua compreensão de enzimas de restrição usando as informações na figura a seguir para responder às perguntas.
Praticando com enzimas de restrição. Um pedaço circular de ADN, um chamado plasmídeo, é de 80 kb de comprimento. As marcas nas plasmídeo indicam sítios de restrição para as enzimas EcoR1 e BamH1.Quais são os tipos de fragmentos de ADN que resultaria se fosse para cortar uma amostra de ADN contendo muitas cópias do plasmídeo mostrado na figura com a enzima de restrio EcoR1?
uma. 1/2 20 1/4 kb, 30 kb, 10 kb 1/4
b. 1/2 20 kb, 60 kb 1/2
c. 1/2 30 kb, 50 kb 1/2
d. Todos os 80 kb
Video: Minecraft: Os Cientistas #08 - Misturando DNA de Mobs !!
Quais são os tipos de fragmentos de ADN que resultaria se fosse para cortar o plasmídeo mostrado com ambas as enzimas de restrio EcoR1 e BamH1,?
uma. 1/2 20 1/4 kb, 30 kb, 10 kb 1/4
b. 1/2 20 kb, 60 kb 1/2
c. 1/2 30 kb, 50 kb 1/2
Video: Aula 15 - Enzima de Restrição - Biologia Molecular [Video Aula]
d. Todos os 80 kb
Quais são os tipos de fragmentos de ADN que resultaria se fosse para cortar o plasmídeo mostrado com a enzima de restrição Hindi II?
Video: Enzimas de Restrição
uma. 1/2 20 1/4 kb, 30 kb, 10 kb 1/4
b. 1/2 20 kb, 60 kb 1/2
c. 1/2 30 kb, 50 kb 1/2
d. Todos os 80 kb
A seguir estão as respostas para as questões práticas.
Se você cortar o DNA com apenas EcoR1, o DNA seria cortado no meio. Todas as peças seria o mesmo tamanho, que seria de 15 kb de comprimento.
Se você cortar o DNA com apenas HindIII, o DNA seria cortado na marca de 22,5 kb. Metade das partes de ADN seria de 22,5 kb de comprimento, e a outra metade seria de 7,5 kb de comprimento (30 kb - 22,5 kb = 7.5 kb).
Se você cortar o DNA com as duas enzimas de restrição, você terá dois cortes - um no ponto médio de 15 kb e o outro na marca de 22,5 kb. Assim, metade das peças seria de 15 kb de comprimento. A outra metade seriam todos 7,5 kb de comprimento (porque o corte em 22,5 kb seria bem no meio da segunda metade do ADN).
A resposta é b. 1/2 20 1/2 kb, 60 kb.
EcoR1 iria fazer dois cortes em cada plasmídeo. Um fragmento seria o comprimento de 0kb a 20kb, que é 20kb- outro fragmento seria o comprimento de 20 kb a 80kb de volta, o que é 60kb.
A resposta é um. 1/2 20 1/4 kb, 30 kb, 10 kb 1/4.
Se se cortar os plasmídeos com ambas as enzimas de restrição, é acabaria com quatro fragmentos por plasmídeo dois - 20 kb em comprimento, um 30kb, e uma 10kb.
A resposta é d. Todos os 80 kb.
Se se cortar o plasmídeo com a enzima de restrição TraseiroIII, você não iria obter quaisquer cortes, porque não existem quaisquer sítios de restrição para esta enzima (enzimas de restrição são específicos para os sites que eles reconhecem).